蛋白分析FAQ汇总

• • 如何知道从头测序服务的序列是否正确？

  这些序列基于质谱数据。根据我们的经验，我们向客户报告的序列正确率超过 99%。相关服务:从头测序

• • 纯化中如何选择色谱填料？

  具有不同序列的肽在理化特性和疏水性方面表现出很大差异。 在大多数情况下，C18 色谱柱对分子量小于 4000 或亲水性的肽段表现出最佳分离效果。 C4 柱适用于分子量超过 5000 或含有疏水末端的肽段。 C8柱介于C18柱和C4柱之间，其效果与C18柱类似。 对于一些特殊的选择性肽段，也可

• • 纯化中选择聚合物填料的原理是什么？

  当要求更高的 pH 或温度时，选择pH范围更宽的聚合物 HPLC 柱可能适用于纯化。 它们在极端pH条件下不会降解，因此可以使用强酸和强碱作为流动相进行分离和纯化。相关服务:肽纯度分析

• • 影响多肽纯化的因素是什么？

  影响多肽纯化的因素很多，主要包括流动相、色谱柱类型、柱温、波长、色谱仪性能等。 这些差异可能会导致最终结果出现错误。相关服务:肽纯度分析

• • 频繁的基线漂移可能是什么原因？ 如何解决？

  反相分离中基线漂移的主要原因是固定三氟乙酸（TFA）浓度的梯度洗脱会导致 210-220 nm 处的吸收基线发生偏移。 建议使检测波长尽可能接近215 nm，以减少或消除由TFA吸收光谱变化所引起的基线漂移。此外，与溶剂B相比，通过在溶剂A中添加15% TFA来补偿基线漂移。例如，如果溶剂

• • 反相色谱纯化后，如何从最终产品中去除流动相中的三氟乙酸（TFA）、乙腈等杂质？

  只要不超出耐受范围，冻干可能是去除大部分三氟乙酸（TFA）和乙腈的最简单和最有效的方法。 但该方法不能满足一些对TFA含量要求较高的多肽类药物的要求， 应与它们进行特殊的盐转化和脱盐处理。相关服务:肽纯度分析

• • 肽的一般盐形式有哪些？ 如何转换盐形式或脱盐？

  大多数肽在三氟乙酸（TFA）体系下纯化，因此TFA盐是最常见的形式，其次是乙酸盐和盐酸盐形式，很少有肽药物是特殊盐形式。 离子交换和高效液相色谱（HPLC）是最常用的盐转化方法，而 G25（GE Healthcare 的葡聚糖凝胶）柱可用于脱盐。相关服务:肽纯度分析

• • 选择色谱设备时要考虑什么？

  规模/流量、自动化、耐压、传感器、易于使用的软件、服务等。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 快速蛋白液相色谱（ Fast Protein Liquid Chromatography，FPLC）如何工作？

  在快速蛋白质液相色谱 (FPLC) 中，Unique Autopure 之类的蛋白纯化仪采集我们的蛋白质样品并将其泵入由特定缓冲液平衡的色谱柱上。 然后用不同的缓冲液或缓冲液梯度清洗色谱柱，不同的成分会以不同的停留时间从柱子中洗出。 Unique Autopure 具有预定义的步骤，用户可以

• • 色谱法（Chromatography）的基本原理是什么？

  色谱法（Chromatography）是一种基于混合物中各组分的亲水性、亲和性、电荷和分子大小差异的分离技术。 不同的色谱技术是根据不同原理或不同原理的组合开发的。常规色谱方法——疏水相互作用色谱（HIC）、离子交换色谱（IEX）、薄层色谱（AC）、分子排阻色谱（SEC）等。相关服务:蛋白质