蛋白分析FAQ汇总

• • 蛋白质翻译后修饰

  Unimod：http://www.unimod.org/modifications_list.php？； PhosphoSitePlus：https ://www.phosphosite.org/homeAction； dbPTM：http ://dbptm.mbc.nctu.edu.tw

• • 使用（SCX）HPLC柱分馏之前是否需要对样品进行脱盐处理？

  当使用阳离子交换剂时，样品（肽/蛋白质）在微酸性pH条件下上样，缓冲液应具有低离子强度（例如20mM磷酸盐缓冲液）。因此，有必要对肽进行脱盐，以使其对阳离子交换基质进行最佳吸附/结合。相关服务:蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）

• • 对于进行自上而下蛋白质组学的人来说，在制备完整蛋白质分析物时，可靠的挥发性缓冲液是什么？

  蛋白质化学中使用的2种最常见的挥发性缓冲液是碳酸氢铵和乙酸铵。相关服务:基于Top down自上而下蛋白质组学

• • 2D-DIGE可以分析那些样品？

  可以从中分离出蛋白质的任何样品都可以进行分析。这包括可以分析的所有生物和临床样品，例如血液，血清，血浆，组织，培养细胞，培养基，肿瘤活检和激光显微解剖样品。所有动物、植物、线虫、微生物、昆虫和鱼类样品也可以进行分析。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 什么类型的缓冲液最适合2D-DIGE实验？

  2D-DIGE过程非常敏感，使用不适当的缓冲系统可能会影响实验的标记效率、再现性和准确性。基本上任何可以容纳上游实验得缓冲液都可以。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 2D-DIGE凝胶上可电泳的最大样品数是多少？

  一个2D-DIGE上最多可以运行多达三个样本。两个样品用Cy3和Cy5标记，第三个样品用Cy2标记。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 电泳2D-DIGE凝胶所需的蛋白质量是多少？

  推荐用于2D-DIGE实验的单个总蛋白质样品的最小量为30μg。但是建议每个样品至少提供100μg。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 2D-DIGE和经典2D（2D-PAGE）有什么区别？

  在2D-DIGE（差异凝胶电泳）技术中，蛋白质样品在通过2D电泳分离之前直接用荧光染料（通常为Cy2、Cy3和Cy5）标记。由于样品可以用不同的荧光染料标记，因此可以在一种凝胶上多重存在，从而减少凝胶之间的差异。而在2D-PAGE中，每个凝胶只能分析一个样品。此外，为了可视化2D-凝胶，凝胶

• • 如何运用WB对IgG和IgM分子进行定性检测？

  检测样品中IgG的典型方法是仅使用IgG抗体的二级抗体。对于化学发光检测，可以使用HRP耦合物或Cy染料标记荧光检测。为了量化其水平可以使用标记的sec.Ab（抗IgG或IgM）对目标蛋白（IgG或IgM）进行印迹，对合适的看家蛋白进行再印迹（如果使用荧光检测，则进行多重检测）。相关服务:蛋

• • 经Maxquant分析后的质谱数据是否可以使用ProteomeDiscoverer进行翻译后修饰分析？

  当质谱数据已经通过MaxQuant分析时，不可能再使用ProteomeDiscoverer进行搜索，因为该程序使用机器原始文件进行分析。MaxQuant有一个包含PTM的选项，并提供有关其位置的信息。可以使用Perseus处理MaxQuant文件，进行PTM分析。相关服务:蛋白质质谱鉴定