蛋白分析FAQ汇总

• • 蛋白质组定量分析需要多少蛋白质？

  iTRAQ 实验的最佳用量是 50 µg 标记蛋白。样品净化过程中的损失可能相当大，并且这是特定于样品的。因此，我们建议提供 200-500µg 的样品，更多的量将提高对低丰度蛋白质的敏感性。相关服务:定量蛋白组分析

• • 什么类型的样品可以进行蛋白质组定量分析？

  细胞裂解物，分泌的蛋白质样品，但不能是放射性样品。注意：分泌的样本必须在无血清/无血浆的培养基中。相关服务:定量蛋白组分析

• • 蛋白质组定量分析样品的最大体积是多少？

  样品体积必须小于 250 µL。相关服务:定量蛋白组分析

• • 可以使用蛋白酶抑制剂吗？

  可以，蛋白酶抑制剂将减少蛋白质降解。相关服务:蛋白分析

• • 正在查看的蛋白质组在当前可用的数据库中存在是否重要？

  是的，因为蛋白质组分析不适用于未知基因组的样本。相关服务:组学分析

• • 从一条凝胶条带中可以鉴定出多少种蛋白质？

  这取决于加载在凝胶上的样品的复杂性。根据我们的经验，我们已经从复杂的细胞裂解物在 12%T minigel 上运行后的一条凝胶条带中鉴定出多达 70 种蛋白质。我们强烈建议不要使凝胶过载，因为它会影响蛋白质的分辨率和分离。此外，它可能导致 LC 中大量肽的“携带”，从而导致在不同样品中重复鉴

• • 可以提交银染凝胶吗？

  可以，如果它是通过质谱兼容的银染流程染色的。许多商业供应商出售此类试剂盒。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

• • 是仅使用胰蛋白酶消化蛋白质还是可以使用其他蛋白质水解酶？

  如果要对样品进行“溶液内消化”，可以使用市售的测序级蛋白水解酶中的任何一种或组合。对于“凝胶内消化”，可用蛋白水解酶变得更加有限。请注意，许多高分子量酶在凝胶内消化方面的效率不如胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶。相关服务:蛋白分析

• • 样品中有洗涤剂，有没有办法去除它？

  是的。最简单和最便宜的方法是使用 TCA 和丙酮沉淀等沉淀技术。这些方法的缺点是一旦沉淀，一些蛋白质很难再悬浮在目标缓冲液中。我们提供使用 Pierce 洗涤剂去除试剂盒来去除洗涤剂的服务。我们已成功使用该试剂盒从样品中去除辛基麦芽糖苷和 SDS。应该注意的是，所有技术的成功都取决于洗涤剂的

• • 我的蛋白质复合物在盐浓度非常高的缓冲液加 5% 甘油中。这种缓冲液与质谱兼容吗？

  不兼容。盐和甘油与质谱不兼容。如果样品含有盐或甘油，我们将使用 zip 吸头或 C18 离心柱对样品进行脱盐。相关服务:蛋白质质谱鉴定