蛋白分析FAQ汇总

• • 凝胶可以长期保存吗？如何保存？会不会影响鉴定效果？

  如果凝胶要保存超过一个月，应该用保鲜膜包裹并保存在冰箱中。如果小于1个月，可以在室温下保存，不会影响质谱分析。

• • 质谱的凝胶蛋白点怎么取？有什么注意事项吗？

  取凝胶蛋白点时，将0.2ml枪头的尖端剪断，用其取出凝胶并转移到0.5ml离心管中。用水冲洗珠子两到三次，然后吸干管子。保持所有防潮密封件就位并做好标记。离心管最好选用进口离心管，避免塑料污染。最好使用去离子水或双蒸水。带上口罩和手套以防止角蛋白污染。

• • 凝胶可以长期保存吗？如何储存和运输？

  蛋白凝胶可以长期保存，不影响质谱鉴定。一般来说，如果是一两周内，最好用保鲜膜包好并存放在4度冰箱。若保存时间超过1个月，可将蛋白点取出置于-20℃或-80℃冰箱中，不影响后续质谱鉴定。在运输蛋白凝胶点时，可以常温运输，三到五天不会有太大影响。

• • 一级质谱和二级质谱如何选择？

  一级质谱鉴定方法通常称为肽质量指纹 （peptide mass fingerprinting，PMF）。二级质谱鉴定方法通常称为串联质谱。早期的蛋白质鉴定，考虑到成本，已测序生物的蛋白质鉴定一般可以用一级质谱仪完成，而未测序生物往往选择二级质谱。但现在，二级质谱仪的价格也大大降低，与一级质谱

• • 质谱的一般流程是什么，企业可以提供哪些数据？

  质谱鉴定主要包括三个步骤：蛋白质水解、质谱数据采集、库检索。每个蛋白点的鉴定，一般提供三类数据，包括：质谱图（PDF格式，包括1张一级质谱和5-10张二级质谱）、质谱峰列表（文本格式，主要是部分MS碎片信息）和检索结果（自建库本地化搜索一般为PDF格式或excel格式；Mascot在线搜索一

• • 将蛋白样品转移到哪种膜比较好？

  用于蛋白质测序的SequiBlot PVDF膜（0.2μm）。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 蛋白样品在凝胶中，可以进行N端测序吗？

  不可以，必须转移到序列级PVDF膜上。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 样品能否以液体形式进行N端测序分析？

  可以，前提是样品是纯的并且在低盐缓冲液中，例如50毫米碳酸氢铵；对于TRIS或磷酸盐缓冲液，最大盐强度为20mM。NaCl、表面活性剂（如SDS）和甘氨酸不能存在。装运前，样品必须在微型离心管中冷冻干燥或冻干。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 做N端测序需要多少蛋白质？

  对于纯蛋白，灵敏度限约为1pmol，但建议提供10pmol以确保满意的结果。若为考马斯染色的目标带必须肉眼可见。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 什么是N端封闭？

  在生理状态下蛋白质的N末端残基发生翻译后修饰的现象。这是一个发生在细胞中的生物过程，通常不是样品制备过程。常见的N-末端封闭基团包括焦谷氨酸、N-乙酰基如乙酰丝氨酸或乙酰苏氨酸和N-甲酰化氨基酸。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析