怎么根据蛋白maker估算条带中蛋白浓度为多少
根据SDS-PAGE中的蛋白质marker(也称为蛋白分子量标准或楼梯)估算条带中蛋白的浓度通常是通过比较条带的颜色深浅(代表蛋白浓度)来完成的。但这只能提供一个大致的估计值。其大致步骤如下:
1.运行SDS-PAGE:
使用已知浓度的蛋白marker和你的样品一起运行SDS-PAGE。
2.染色:
通常使用如Coomassie Brilliant Blue或银染色等染料对胶进行染色,然后去色以显示蛋白条带。
3.比较深浅:
观察胶上的条带。与marker相比,样品中的蛋白条带颜色越深,则蛋白浓度越高。
4.估算浓度:
如果你知道marker中各个条带的蛋白浓度,你可以通过比较样品条带与与之最接近的marker条带的颜色深浅来估算样品的蛋白浓度。例如,如果一个marker条带的浓度为50 μg,且其颜色深浅与你的样品条带相近,那么你可以估计你的样品条带中的蛋白浓度也大约为50 μg。
5.定量化软件:
有些研究者使用凝胶成像系统和定量化软件来更准确地估算条带的浓度。软件可以通过分析条带的颜色深浅来定量化蛋白的丰度,并与已知浓度的marker进行比较。
需要注意的是,这种方法只能提供蛋白浓度的大致估计。若要准确测量蛋白浓度,你可能需要使用其他方法,如Bradford蛋白测定、Lowry蛋白测定或BCA蛋白测定等。
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