为啥我跑sds-page的时候不是一直线?我用乙醇沉淀蛋白,碳酸氢铵复溶?
SDS-PAGE 是一种常用的蛋白质分离技术,用于根据蛋白质的分子量进行分离。如果你的结果不是一条直线,可能有以下几个原因:
1.样品加载量过多或过少:
如果你加载的样品量过多,可能会导致带状模糊或重叠;如果加载的样品量过少,可能会导致带状模糊或信号弱。建议优化样品加载量,使其适中。
2.样品预处理不当:
在进行 SDS-PAGE 前,样品通常需要进行预处理,如蛋白质提取、浓缩和变性。如果预处理不当,可能会影响结果的清晰度。建议仔细选择和优化样品预处理方法。
3.胶液配制不当:
SDS-PAGE 胶液的配制需要精确的比例和 pH 值。如果配制不当,可能会导致胶液聚合不均匀或 pH 值偏离理想范围,进而影响结果的清晰度。建议仔细按照实验方案准确配制胶液。
4.电泳条件不当:
电泳条件包括电压、电流和时间等参数。如果电泳条件不合适,可能会导致带状模糊、扩散或偏移。建议优化电泳条件,确保参数设置正确。
如果你想要用乙醇沉淀蛋白,再用碳酸氢铵复溶,那你可能需要注意:
乙醇沉淀可能会导致蛋白质的聚集或损失,从而影响 SDS-PAGE 的结果。建议在乙醇沉淀后进行蛋白质的溶解和变性处理,以确保蛋白质的完整性和稳定性。
碳酸氢铵的使用可能会导致 pH 值的变化,从而影响 SDS-PAGE 胶液的 pH 值和电泳结果。建议在使用碳酸氢铵进行蛋白质复溶时,注意控制 pH 值的变化,并在复溶后进行必要的调整。
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