请问准备做蛋白质谱,怎么准备组织蛋白啊?
准备组织蛋白用于蛋白质谱分析需要遵循几个关键步骤,以确保样品的质量和适用性:
1.组织采集和储存:
首先,需要在低温条件下迅速采集组织样本,以防止蛋白降解。采集后的组织样本通常在液氮中冷冻保存,或者存放在-80°C的冰箱中。
2.组织均质化:
组织样本需要通过物理方法(如均质机)进行破碎,使细胞破裂释放蛋白质。在此过程中,通常会添加含有蛋白酶抑制剂的缓冲液,以防止蛋白质在提取过程中被降解。
3.蛋白提取和纯化:
使用适当的提取缓冲液,如RIPA缓冲液,以提取组织中的蛋白质。之后,可通过离心等方式去除不溶物,得到清澈的蛋白质溶液。
4.蛋白质浓度测定:
使用Bradford、BCA或其他蛋白定量方法确定蛋白质浓度,确保样品中蛋白质含量适宜后续分析。
5.蛋白质消化:
常用胰蛋白酶进行消化,将蛋白质分解成较小的肽段,便于质谱分析。
6.样品准备:
根据质谱仪器的要求,对消化后的肽段进行适当处理,如去盐、浓缩等。
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