你好,我正在做蛋白交联,想知道使用了交联剂之后样品如何处理呢?直接加入裂解液裂解吗?
在交联法蛋白相互作用分析实验中,使用了交联剂(如甲醛)对细胞进行处理后,通常需要先停止交联反应,比如通过添加Tris缓冲液、甘氨酸或者通过快速将细胞冷却至4°C来实现。细胞交联后,可以进行冷冻保存,或者立即进行裂解。
以加入甘氨酸为例:
1.交联后加入甘氨酸(glycine),甘氨酸可以和甲醛反应,从而终止甲醛的交联作用。
2.将细胞冲洗几次以去除未反应的甘氨酸和甲醛。
3.将细胞收集起来并加入裂解液以进行下一步的实验。根据你的实验目标,你可能需要选择适合的裂解液,如RIPA裂解液或NP-40裂解液。
4.然后通过机械或超声的方式使细胞裂解。
5.最后,通过离心等方法,去除细胞残渣,收集含有蛋白的上清液。
以上步骤只是通常的实验流程,具体的实验步骤可能会因为你的实验设计和目标而有所不同。如果你在实验过程中遇到任何问题,我建议你寻求实验室的同学、导师或咨询相关领域的专业人士。
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