GST融合蛋白如何纯化？
GST融合蛋白（Glutathione S-transferase fusion protein）是指将目标蛋白与GST蛋白通过基因工程手段连接在一起，以便于目标蛋白的表达和纯化。GST融合蛋白纯化利用了GST蛋白与谷胱甘肽（Glutathione，GSH）之间的特异性结合，通过谷胱甘肽亲和层析法进行纯化。
GST融合蛋白纯化的主要步骤如下：
1.转化表达载体：
将含有GST融合蛋白编码基因的表达载体转化至宿主细胞（如大肠杆菌）中。
2.诱导表达：
通过诱导剂（如IPTG）诱导宿主细胞中GST融合蛋白的表达。
3.细胞破碎：
收集经过诱导表达的宿主细胞，采用超声、高压断裂或酶解等方法进行细胞破碎，释放出含有GST融合蛋白的细胞裂解物。
4.裂解物处理：
通过离心等方法去除细胞残渣和不溶性物质，得到清亮的细胞裂解物。
5.谷胱甘肽亲和层析：
将细胞裂解物加入预平衡的谷胱甘肽亲和层析柱（Glutathione Sepharose column），GST融合蛋白会与柱中的谷胱甘肽结合。之后，用平衡液洗脱非特异性结合的蛋白质。
6.洗脱GST融合蛋白：
使用含有较高浓度谷胱甘肽的洗脱液洗脱柱中的GST融合蛋白。这是因为洗脱液中的谷胱甘肽与柱中的谷胱甘肽竞争结合GST蛋白，从而使GST融合蛋白脱离柱子。
7.目标蛋白的回收：
若需要纯化目标蛋白，可以通过特异性蛋白酶（如TEV蛋白酶或Thrombin）切割GST与目标蛋白之间的连接部位，释放出目标蛋白。然后通过进一步的层析等方法去除GST蛋白。
8.蛋白纯度检测和浓缩：
通过SDS-PAGE、Western blot等方法检测纯化后的GST融合蛋白或目标蛋白的纯度。如有需要，可以采用超滤、凝胶过滤或其他方法对蛋白进行浓缩。
9.蛋白质的保存：
将纯化得到的GST融合蛋白或目标蛋白存储在适当的缓冲液中，并将其放入低温（如-20°C或-80°C）环境中保存。
GST融合蛋白纯化主要通过谷胱甘肽亲和层析法进行，其优点是方法相对简单，特异性强，可以获得较高纯度的蛋白质。在实际操作过程中，需要注意各个步骤的细节以确保纯化效果。
百泰派克生物科技--生物药物表征，多组学生物质谱检测优质服务商
相关服务：
GST融合蛋白Pull-down技术结合质谱联用的蛋白互作分析
How to order?
