自制抗体做WB，跑重组蛋白有目的条带，跑组织就没目的条带，这是怎么回事呀？

在使用自制抗体进行Western Blot实验时，如果跑重组蛋白时有目标条带，而在跑组织时没有目标条带，可能有以下几个原因：




1.组织中目标蛋白表达量低：

组织样本中目标蛋白的表达量可能较低，低于检测限。这种情况下，可以尝试提高组织蛋白质样本的浓度或优化实验条件来提高检测灵敏度。




2.组织制备不充分：

可能是因为组织提取过程不够充分，导致目标蛋白没有被完全提取。可以优化组织提取方法，确保目标蛋白被有效提取。




3.抗体特异性：

自制抗体在识别重组蛋白时可能表现出较高的特异性，而在组织样本中，可能由于其他蛋白质的干扰，导致抗体识别受到影响。可以尝试改进抗体的纯化和亲和性，以提高抗体的特异性。




4.抗体浓度不适当：

使用的抗体浓度可能不适合组织样本。可以尝试优化抗体浓度，以获得更好的检测效果。




5.组织样品中蛋白质降解：

组织样本中的蛋白质可能在处理过程中发生降解。确保在组织处理过程中加入蛋白酶抑制剂，并迅速进行组织破碎和离心，以减少蛋白质降解的可能性。




6.实验操作差异：

在不同的实验操作过程中，可能存在一定的差异。确保实验操作的一致性，以便在不同实验条件下获得可靠的结果。




要解决这个问题，首先需要优化实验条件，例如提高组织蛋白质样本的浓度、改进抗体纯化和亲和性、优化抗体浓度和检测灵敏度。同时，确保实验操作的一致性和组织样品的完整性。




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