iTRAQ/TMT实验的中"组分"或者"SCX分级"代表什么?
iTRAQ/TMT实验中的“组分”或“SCX分级”是指在肽段混合后,通过强阳离子交换色谱(Strong Cation Exchange Chromatography, SCX)将混合的肽段进行分级分离的过程。这一步是为了降低复杂度,以便后续液相色谱-质谱(LC-MS/MS)分析。
SCX是一种基于肽段带正电荷的液相色谱分离技术。在SCX色谱柱中,固定相上的化学基团带负电荷,可以与肽段上的正电荷相互作用。在实验过程中,通过改变流动相中的盐浓度和pH值,可以调整肽段与固定相之间的相互作用,从而实现不同肽段的分离。通常,肽段在SCX柱上的保留时间与其正电荷数成正相关,正电荷数较小的肽段先被洗脱,而正电荷数较大的肽段保留时间较长。
在iTRAQ/TMT实验中,SCX分级的主要目的是进一步降低肽段复杂度,提高质谱检测的灵敏度和准确度。SCX分级后得到的组分可以分别进行反相液相色谱-质谱(RP-LC-MS/MS)分析,从而提高蛋白质鉴定和定量的覆盖范围。
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