我提取细胞蛋白还没有归一化(没加lodingbuffer和pbs)，放在-20°C之后能保存多久呀？

一、未进行归一化（未添加loading buffer或PBS）的细胞蛋白样本在-20°C保存的稳定性受以下关键因素影响

1、蛋白水解风险

样本中的内源性蛋白酶（如丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶）在-20°C仍保有部分活性，可能缓慢降解目标蛋白，短期内（<48小时）影响较轻，但长期保存（>7天）可能导致显著降解。  

 

2、pH稳定性

未用PBS调节渗透压及pH时，冻融过程易诱发局部pH波动，导致蛋白聚集或构象改变，尤其对膜蛋白或pH敏感蛋白（如磷酸酶）影响显著。  

 

二、保存时效建议

（1）短期保存（24-72小时）：若样本已完全裂解且无可见沉淀，短时保存可接受，但需在实验前检测β-actin或GAPDH等管家蛋白条带完整性。  

（2）中长期保存（>72小时）：建议分装后转存-80°C，避免反复冻融（每冻融一次可能导致5-10%蛋白降解）。  

 

三、操作建议  

1、若需延后处理，建议优先添加蛋白酶抑制剂（如1×PMSF+1×EDTA-free Roche cOmplete™）并分装冻存于-80°C。  

2、避免直接冻存高浓度蛋白样本（>5 mg/mL），以减少冰晶形成导致的机械损伤。  

（验证方法：取同一时间点样本行SDS-PAGE观察条带拖尾或降解情况，结合Western blot目标蛋白检测）

 

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