WB实验我需要有什么准备?

在进行Western Blot（WB）实验之前，有几个关键准备工作需要完成：




一、实验设计:

• 确定目的蛋白和合适的抗体（一抗和二抗）
• 选择合适的加载对照（如GAPDH、β-actin等）
• 确定样品类型（细胞裂解物、组织提取物等）




二、样品准备:

• 收集和制备样品（细胞培养、组织样本等）
• 使用适当的裂解缓冲液裂解细胞或组织，提取蛋白
• 测定蛋白浓度（如Bradford、BCA蛋白测定法）




三、电泳准备:

• 准备SDS-PAGE凝胶（可以是预制凝胶或自制凝胶）
• 配制电泳缓冲液
• 准备样品（加入样品缓冲液并煮沸）




四、转膜准备:

• 准备PVDF或硝酸纤维素膜
• 配制转膜缓冲液
• 准备转膜设备（如半干式或湿式转膜系统）




五、膜阻断和抗体孵育:

• 准备阻断缓冲液（如5%脱脂奶粉或BSA溶液）
• 准备一抗和二抗溶液




六、检测:

• 准备适合所用二抗的检测系统（化学发光、荧光等）




七、其他材料和设备:

• 微量离心管、移液器、热块或水浴、电泳槽、电源、膜夹持器、震荡器等。
• 实验室通用耗材（手套、纸巾、洗涤液等）。




八、实验记录和数据分析:

• 准备实验记录本，详细记录实验的每一步
• 确定数据分析的方法和软件




在进行WB实验之前，建议仔细阅读相关的操作手册，如果有必要，可以先进行小规模的预实验来优化条件。对于实验中可能出现的问题，准备一些排错策略也是非常有帮助的。




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