western blot磷酸化的蛋白表达能不能比总蛋白多
是的,在Western Blot实验中,有时磷酸化蛋白的表达量可能比总蛋白的表达量多。通常,总蛋白的表达量是由一种蛋白质的所有形式(包括其磷酸化和非磷酸化形式)决定的,而磷酸化蛋白的信号通常是通过使用针对特定磷酸化位点的抗体来检测的。以下几点可能解释为什么在某些情况下观察到的磷酸化蛋白水平似乎高于总蛋白水平:
1.抗体亲和力:
磷酸化抗体的亲和力可能比总蛋白抗体的亲和力更强,从而产生更强的信号。
2.检测灵敏度:
检测特定磷酸化形式的方法可能比检测总蛋白更为敏感。
3.磷酸化动态变化:
在某些生理或病理条件下,蛋白的磷酸化水平可能会上升,即便总蛋白水平保持不变。
4.实验操作误差:
操作过程中的实验误差,例如抗体稀释、洗脱条件、或者曝光时间的不一致,也可能影响实验结果。
5.基底表达水平:
如果某些磷酸化蛋白在基础水平上就具有较高的表达量,可能会被检测到相对较高的信号强度。
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