western blot如何定量测定细胞中某蛋白表达量?
Western blot（蛋白质印迹法）通常用于定性分析蛋白质的存在以及研究它们在不同条件下的表达变化。其大致步骤如下：
1.样品制备:
使用合适的裂解缓冲液将细胞裂解，并使用蛋白质浓度测定方法（例如BCA或Bradford法）测定蛋白质总浓度。
2.SDS-PAGE:
根据预期的蛋白大小选择适当的凝胶，并加载相同量的总蛋白至各通道。
3.转印:
将SDS-PAGE上的蛋白转移到PVDF或nitrocellulose膜上。
4.封闭:
使用非特异性的蛋白（如脱脂牛奶或BSA）阻止膜上未结合的部位。
5.主抗体孵育:
使用针对目标蛋白的特异性抗体孵育。
6.次抗体孵育:
使用对主抗体的二抗孵育，该二抗通常与荧光物质或酶标记。
7.检测:
使用化学发光试剂或其他方法检测目标蛋白的信号。
8.定量:
使用影像分析软件，如ImageJ，分析带的灰度值。为了校正加载差异，经常使用内参蛋白，如GAPDH或β-actin，进行归一化。根据得到的灰度值和内参的灰度值，计算目标蛋白的相对表达量。
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