如何用ImagJ进行WB定量分析
使用ImageJ进行Western Blot(WB)定量分析的基本步骤如下:
1.导入图像:
打开ImageJ程序,选择‘File’>‘Open’来导入你的WB图像。
2.调整图像大小和对比度:
为了得到最佳的分析结果,你可能需要调整图像的亮度和对比度。选择‘Image’>‘Adjust’>‘Brightness/Contrast’来进行调整。
3.选择ROI(Region of Interest):
使用矩形选择工具在你想要量化的条带上选择一个区域。
4.分析:
选择‘Analyze’>‘Gels’>‘Plot Lanes’。这将为你选择的每个条带提供一个峰值图。从这个峰值图,你可以量化条带的强度。
5.定量:
条带的强度可以与一个已知浓度的标准样品进行比较,以定量你的样品中的目标蛋白的含量。
对于细胞表面的两种膜蛋白的分子数的检测,Western Blot通常用于蛋白的相对或绝对定量,但不直接用于确定细胞表面的分子数。要精确地测量细胞表面的蛋白分子数,通常需要使用像流式细胞仪这样的技术,并使用荧光标记的抗体来标定目标蛋白。结合适当的标准品,流式细胞仪可以估计细胞表面的分子数。
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