流式细胞可以对蛋白绝对定量吗?我想检测一种细胞表面两种膜蛋白的分子数,有什么好的方法吗?
流式细胞仪(Flow Cytometry)是一种用于分析和分离细胞的技术。它可以定性地检测细胞表面或细胞内的标记物,但通常用于相对定量,即比较不同样品之间蛋白的相对表达量。为了实现蛋白的绝对定量,特别是细胞表面的膜蛋白,可以采用以下方法:
1.质谱法:
质谱法可用于绝对蛋白定量,例如多重反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)或平行反应监测(parallel reaction monitoring, PRM)。这些方法结合质谱仪和已知浓度的标准物质,允许您测量蛋白质的绝对分子数。
2.单分子技术:
例如,单分子荧光显微镜(single-molecule fluorescence microscopy)或单分子结构照相技术(single-molecule localization microscopy)。这些方法允许您在单个蛋白质水平上观察和计数细胞表面蛋白。然而,这些技术通常需要高端显微镜设备和高度精确的分析,因此可能需要更多的时间和资源。
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