做WB实验,蛋白电泳,蓝色指示剂有时候是很细的条带,有时候弥散成很宽的条带,这是为什么呢?
这个问题是关于Western blot实验中,电泳跑胶过程的把控以及染色效果的疑惑。如果你注意到你的蓝色指示剂有时候呈现很细的带状,有时候弥散成很宽的带,这可能跟多个因素有关。我会列举每一个可能的原因,并给出相应的解决策略。
1.样品处理不当:
如果蛋白样品没有充分的显色,或者显色不均匀,会导致染色物的扩散。此外,如果你使用的是非常浓度的样品,可能会使得试剂在电泳过程中无法将蛋白质分散开来。
解决策略:
改变样品处理的方法,确保样品的溶解完全,控制好样品浓度。
2.电泳条件不适宜:
电泳时间太长,电流过大,或者电泳时胶的浓度不适合用于你的样品,用户的设定电压也未达到理想效果或者过高,都可能会使得蛋白带变宽或者出现斑点状的扩散。
解决策略:
调整适当的电泳条件适配你对蛋白分离度和分辨率的需求。
3.胶体质量问题:
如果在准备聚丙烯酰胺凝胶的过程中,混合不均匀或者出现气泡,都可能会导致电泳后蛋白带的质量下降,呈现扩散的情况。
解决策略:
在制备凝胶的过程中,需要充分混合并排除气泡。
4.显色时间短或过长:
显色时间如果过短,有可能造成蛋白带不够清晰,不易辨别;如果过长,也可能会导致具有扩散现象,影响后续结果的观察与分析。
解决策略:
根据实验室的操作经验,选择适当的显色时间。
这些都可能是导致电泳结果效果不佳的原因,希望以上的分析和解决策略可以帮助改善实验的效果。
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