wb实验中目的蛋白为什么比预期低?
- 蛋白提取不完全：你可能没有完全破裂细胞，使得一部分蛋白没有被提取出来，尝试更改细胞破裂方法，例如使用更有效的破裂试剂或使用超声波破裂。
- 蛋白降解：在蛋白提取过程中，蛋白可能被酶降解。确保在蛋白提取过程中添加蛋白酶抑制剂，并且避免长时间室温下操作。
- 蛋白浓度测定误差：浓度测定误差也可能是问题所在，可以考虑使用不同的蛋白定量方法。
- 蛋白质在SDS-PAGE中分解或丢失：确保SDS-PAGE电泳条件的选择和设置是正确的。以及确认是否有蛋白在电泳过程中分解或者进样缓冲液配比不正确导致的蛋白质丢失。
- 蛋白在转膜过程中的损失：膜的孔隙度，转膜缓冲液，以及电压选择等因素都可能影响转膜效率。
- 不适合的抗体：抗体可能不够特异，或者在你的实验条件下不能很好地识别目的蛋白。可能需要尝试不同的抗体或优化抗体浓度和孵育条件。严谨的对照实验（如过表、敲降表达等）必不可少。
- 孵育和洗涤条件：孵育时间、孵育温度以及洗涤时间等可能影响最后的结果。
- 长时间曝光：长时间曝光可能导致目的蛋白的信号被覆盖。你应该调整曝光时间以优化结果。
- 蛋白表达量本身就低：某些蛋白在特定条件下，其表达量本身就很低。
- 蛋白稳定性差：在一些情况下，特定的蛋白质可能会迅速降解，使得检测蛋白质的水平比预期要低。
Western Blot实验中，目的蛋白表达比预期低的原因可能有以下几个方面：
1.蛋白提取问题：
2.SDS-PAGE和转膜问题：
3.免疫印迹问题：
4.关于目的蛋白本身的问题：
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