两个蛋白WB时共用了内参,但作图两个蛋白分别在两张图,这种可以用同一内参吗?
当你在Western Blot (WB) 实验中使用内参蛋白(例如 GAPDH、β-actin 等)来对两个目的蛋白进行标准化时,理论上,只要你确保了以下几点,即使两个蛋白被分别展示在两张图中,你也可以使用相同的内参蛋白:
1.来自同一样品:
确保两个目的蛋白与内参蛋白都是来自同一份细胞裂解液或组织提取物。
2.相同的样品处理流程:
确保两个目的蛋白都经过了相同的样品处理流程(例如样品的制备、沸腾时间、电泳条件等)。
3.相同的转印效率:
转印步骤中,确保蛋白从凝胶转移到膜上的效率是恒定的,不会因为不同的蛋白而发生变化。
4.减少人为干扰:
操作过程中要尽量避免人为因素导致的误差,例如样品的加入量、电泳时间、转印时间等。
5.记录内参的信号强度:
对于内参的信号,你需要确保记录其信号强度,并用于后续的定量分析和标准化。
6.确保内参蛋白的表达是恒定的:
内参蛋白应该在不同的条件下或在不同的样品中保持恒定的表达,如果内参蛋白的表达受到某些实验条件的影响,那么它可能不适合作为一个好的内参。
只要你确保了上述各点,那么即使两个目的蛋白被分别展示在两张图中,也是可以使用相同的内参蛋白进行定量分析和标准化的。但为了提供更有说服力的数据,最好在文章或报告中注明使用了相同的内参,并确保读者能够清楚地了解到你的实验设计和数据处理流程。
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