大分子蛋白（220kd）wb怎么跑出清晰的条带？
大分子蛋白（如220 kDa）在Western Blot（WB）中有时可能难以获得清晰的条带，因为这些蛋白质的迁移和转移可能会受到影响。希望以下建议可以帮助您在进行大分子蛋白WB电泳时获得清晰的条带：
1.凝胶选择：
使用较低浓度的凝胶（例如6%或8%）来增加孔隙大小，从而更好地解决大分子蛋白。
2.电泳条件：
使用较低的电压进行电泳。例如，可以选择在80-100V下运行整个凝胶。这有助于防止蛋白过快迁移并避免凝胶过热。
增加电泳时间，使大蛋白有足够的时间迁移。
3.转移条件：
大蛋白的转移通常比较困难。考虑使用湿式转移并延长转移时间。例如，可以考虑在30V下转移 overnight。
使用0.45μm的PVDF或硝酸纤维素膜。PVDF膜对于大蛋白的结合特性较好。
确保转移缓冲液中包含适量的甲醇（通常为20%）。甲醇可以增加孔隙大小，帮助大分子蛋白的转移。
考虑使用低冷的转移缓冲液或使用冷冻装置，以避免过度加热。
4.样品制备：
仔细进行样品制备，确保充分变性和还原，以便大分子蛋白完全展开。
避免使用过多的样品，这可能导致条带模糊。
5.染色和检测：
使用高灵敏度的检测方法，因为大蛋白的转移效率可能较低。
在实验之初，使用快速染色（例如Ponceau S染色）检查蛋白的转移效果，再根据需要调整转移条件。
6.其他因素：
使用新鲜的电泳和转移缓冲液。
确保蛋白样品不含杂质或沉淀，这可能影响电泳效果。
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