蛋白末端测序

    组成蛋白质的多肽链不是闭合的,而是链状的化合物,含有两个末端,即氨基端(N端)和羧基端(C端)。大量研究表明蛋白质的C端和N端有着不同的重要作用:蛋白质N端序列与蛋白质的寿命和亚细胞器定位等有密切关系;C端序列影响蛋白质和多肽的空间结构和生物功能。对蛋白的末端序列进行研究有利于蛋白质的高级结构分析,从而揭示蛋白质的生物学功能。

    蛋白质C端测序方法

    蛋白质C端测序的方法主要有羧肽酶法、化学法和串联质谱法等。羧肽酶法和化学法的策略是通过酶解法或化学试剂裂解法获得C端氨基酸,再结合液相色谱或质谱技术对氨基酸种类进行鉴定。串联质谱法测定蛋白质C端序列的原理则是将蛋白质样品酶解、消化成肽段混合物,然后对肽段混合物进行串联质谱分析,通过一级质谱信息选择C端肽段离子进行二级质谱分析,再根据二级质谱数据结合相应软件和数据库计算蛋白质的C端氨基酸序列。

    蛋白质N端测序方法

    蛋白质N端测序的方法包括传统的Edman降解法、逆转录PCR法(RT-PCR)和质谱法。Edman降解法要求较高的蛋白质或多肽纯度,且不能用于N端封闭的蛋白质。RT-PCR根据反转录得到的DNA,通过遗传密码表来推演对应的氨基酸序列,该方法简便快速,但不能预测由突变或翻译后加工引起的氨基酸残基变化,故不能完全真实的反应原蛋白的N端序列。

    蛋白N/C端测序

    质谱法可以同时实现蛋白N端和C端序列测序,包括N端封闭和聚乙二醇化蛋白的序列测定。质谱法的灵敏度、准确度和分辨率都比较高,在蛋白质序列分析中的应用广泛。

    百泰派克生物科技基于Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪提供蛋白质末端测序一站式技术服务,用于蛋白或活性多肽N端和C端序列分析,还可用于确认重组蛋白表达情况,如是否完整表达、表达过程是否发生断裂以及N端和C端序列是否发生修饰等。百泰派克生物科技还可根据需求提供定制化技术服务,欢迎免费咨询。

    相关服务:
    生物制药N/C端测序
    基于Edman降解的蛋白质N端测序
    基于质谱的序列分析
    基于质谱的蛋白测序
    基于质谱的抗体测序
    基于质谱的多肽测序
    基于PCR扩增的单克隆抗体测序服务
    蛋白全序列测定
    基于Top down自上而下法的蛋白质测序
    从头测序

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