蛋白质C端和N端测序

    组成蛋白质的多肽链不是闭合的,而是链状的化合物,含有两个末端,即氨基端(N端)和羧基端(C端)。蛋白质的C端和N端有着特殊的意义:研究表明,蛋白质N端序列与蛋白质的寿命和亚细胞器定位等有密切关系;C端序列影响蛋白质和多肽的空间结构和生物功能。蛋白质C端N端测序研究有利于分析蛋白质的高级结构,揭示蛋白质的生物学功能。

    蛋白质C端测序

    蛋白质C端测序的方法主要有羧肽酶法、化学法和串联质谱法等。羧肽酶法和化学法的策略是通过酶解法或化学试剂裂解法获得C端氨基酸,再结合液相色谱或质谱技术对氨基酸种类进行鉴定。串联质谱法测定蛋白质 C端序列的原理是将蛋白质样品酶解、消化成肽段混合物,然后对肽段混合物进行串联质谱分析,通过一级质谱信息选择C端肽段离子进行二级质谱分析,再根据二级质谱数据结合相应软件和数据库计算蛋白质的C端氨基酸序列。

    蛋白质N端测序

    蛋白质N端测序的方法包括传统的Edman 降解法、逆转录PCR法(RT-PCR)和质谱法。Edman 降解法要求较高的蛋白质或多肽纯度,且不能用于N端封闭的蛋白质。RT-PCR根据反转录得到的DNA,通过遗传密码表来推演对应的氨基酸序列,该方法简便快速,但不能预测由突变或翻译后加工引起的氨基酸残基变化,故不能完全真实的反应原蛋白的N端序列。相比前两种方法,质谱法的灵敏度、准确度和分辨率都比较高,在蛋白质序列分析中的广泛应用,为蛋白质的N端测序提供了一种重要的选择。

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    相关服务:
    蛋白质N/C端测序
    蛋白全序列测定
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