磷酸化与非磷酸化蛋白的鉴定
蛋白质磷酸化是调节蛋白质功能所需的常见翻译后修饰,在细胞中很常见,对于蛋白质分子的激活或失活是必需的,特别是在影响代谢途径或过程的酶中很常见,这也使得磷酸化蛋白质的研究得到越来越多的关注,磷酸化蛋白研究的内容主要包括磷酸化蛋白的鉴定、水平以及作用等,其中,磷酸化蛋白的鉴定是需要首要解决的问题。
磷酸化蛋白的鉴定与天然蛋白(非磷酸化蛋白)的鉴定在内容和方法上都存在差异:磷酸化蛋白鉴定主要是验证蛋白是否发生磷酸化、鉴定发生磷酸化的氨基酸位点以及发生磷酸化的蛋白质的含量。天然蛋白的鉴定就是对蛋白质进行定性(如蛋白质分子质量、氨基酸序列、结构及其他理化性质)和定量鉴定。其次,在鉴定方法上,除了利用普通的蛋白鉴定方法(如质谱法)外,还可通过特定的磷酸化蛋白鉴定方法进行鉴定,如蛋白印迹法(Western Blot)、
酶联免疫吸附分析(ELISA)、细胞内流式细胞术和免疫细胞化学/免疫组织化学(ICC/IHC)技术等。
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