打质谱需要做蛋白定量吗
质谱本身就是一种用于化合物定性定量鉴定的技术,因此,进行质谱分析前不需要已知的蛋白质含量,定量不是质谱分析前的必要条件,而是质谱分析的结果。
质谱通过检测各肽段离子的信号峰强度信息结合生物信息学手段进行蛋白质含量鉴定,续航用的基于的质谱的蛋白定量方法可以根据是否使用标签分为标记策略和非标记策略(Label Free),标记策略使用同位素标签标记不同的肽段,如TMT(串联质量标签)、SILAC(细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记)、iTRAQ(相对定量和绝对定量等压标签)以及15N代谢标记等。质谱定量结果一般为相对含量,如果使用已知浓度的内标肽作为标准品,则可以根据内标肽的量、内标肽的信号强度以及肽段样品的信号强度计算出蛋白质的绝对含量。
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