Bottom-up蛋白质研究
质谱技术是目前进行蛋白质组学研究最常用最先进的技术手段,可以实现蛋白质的定性定量鉴定、结构分析、蛋白相互作用分析以及翻译后修饰分析等。根据质谱分析的对象可以将其分为不同的分析策略:自上而下(Top-down)和自下而上(Bottom-up)。Top-down策略以完整蛋白质为直接分析对象,Bottom-up策略将完整的蛋白质或多肽大分子酶解消化为小片段的肽段,以小分子肽段为直接研究对象,这种从肽段分析到蛋白分析的顺序就称为自下而上策略。
利用Bottom-up策略进行蛋白质研究的基本过程是将蛋白质样本进行多酶促反应消化成肽段混合物,通过液相色谱串联质谱分析得到肽质量指纹图谱(PMF),最后对PMF进行生物信息学分析实现对肽段的鉴定,进一步拼接、验证等实现蛋白质的鉴定。
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