DNFB和Edman原理相同吗
DNFB和Edman是两种不同的蛋白质N末端序列分析方法,其原理不相同但是非常类似,都是利用化合物与蛋白质的末端氨基酸进行反应生成氨基酸-化合物复合体,再对该产物进行鉴定从而实现N末端氨基酸序列的分析,只是两者利用的化合物以及反应的原理不同。下面对两种方法的原理进行简单介绍。
DNFB即2, 4-二硝基氟苯,在弱碱性环境(pH=8.0~9.0)下可以与蛋白质N末端的α氨基酸结合生成稳定的2, 4-二硝基苯氨基酸(DNP-氨基酸),DNP-氨基酸易溶于有机溶剂如乙醚和乙酸乙酯等,用有机溶剂提取DNP-氨基酸,再通过纸层析法或色谱法对其进行鉴定。
Edman降解法通过循环3个化学反应实现N末端氨基酸的序列测定。其基本原理是利用异硫氰酸苯酯(PITC)特异性识别并连接在待测蛋白质的N端氨基酸上形成PITC-蛋白复合物;在酸处理条件下,PITC连接的N端氨基酸被切割,形成不稳定的PITC-氨基酸复合物;被萃取的PITC-氨基酸复合物在酸性条件下转化为稳定的苯基乙内酰硫脲(PTH)衍生物;最后利用高效液相色谱HPLC鉴定氨基酸种类。每次Edman 反应只断裂一个氨基酸,将少了一个氨基酸的多肽链进行回收并重复以上操作,直到最后鉴定出N末端的氨基酸排列顺序。
百泰派克公司采用岛津公司Edman测序系统,为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman的N端测序服务技术包裹,可对纯化后蛋白产物、抗体以及蛋白疫苗的N末端氨基酸序列进行准确测定。此外,百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台,可以测出封闭和修饰的蛋白质末端,与Edman降解法形成互补,保证N端测序服务的顺利进行。
相关服务:
基于Edman降解的蛋白N端序列分析
蛋白质N/C端测序
生物制药N/C端测序
基于质谱的序列分析
基于Top down自上而下法的蛋白质测序
基于PCR扩增的单克隆抗体测序服务
蛋白测序
多肽测序
抗体测序
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