未知蛋白测序
蛋白质的氨基酸序列是决定蛋白质结构和功能的基础,蛋白测序即对组成蛋白质的氨基酸种类和排列顺进行测定,是蛋白组学研究中的重要内容,常见方法包括质谱法(如串联质谱)和Edman降解法。未知蛋白(unknown protein)通常是指那些尚未被充分研究和描述的蛋白质。这些蛋白质可能是由新发现的基因编码的,或者是已知生物体中的基因产物,但其结构、功能和作用尚未被完全理解。未知蛋白测序有助于揭示生物体的基因组和蛋白质组的全貌,对于研究蛋白质结构与功能,促进生物技术、药物开发和疾病诊断等领域的进步具有关键意义。
百泰派克生物科技BTP基于Thermo公司最新推出的Obitrap Exploris 240质谱仪实现未知蛋白样品的序列分析,采用常用的6种蛋白酶(Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N)分别对靶蛋白进行酶切和质谱测定,在得到碎裂肽段片段的同时,经过肽段之间的拼接完成蛋白序列100%的测定。
百泰派克生物科技BTP未知蛋白测序流程
1.样品准备:
提取蛋白质,并通过纯化过程去除杂质。
2.蛋白分级/分离:
将蛋白质样品进行分级或分离,通常采用一维或二维凝胶电泳(1D/2D-PAGE)以及液相色谱(如HPLC)等方法。
3.蛋白酶切/消化:
通过多重酶解(如Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N)将蛋白质分解成较小的肽段,便于后续进行质谱分析。
4.肽段分离:
采用液相色谱(如反相高效液相色谱,RP-HPLC)将蛋白酶切后得到的肽段进一步分离。
5.质谱分析:
将肽段通过质谱仪进行分析,质谱分析的结果可以获得肽段的质量、电荷状态等信息。
6.肽段测序:
通过串联质谱(如MS/MS)对肽段进行进一步的测序。
7.数据处理与分析:
使用专门的质谱软件如Mascot、Sequest 等结合已知的蛋白质数据库对质谱数据进行分析处理。
未知蛋白测序技术的主要应用
1.新蛋白质的发现:
通过对未知蛋白质的测序和功能注解,可以发现新的生物催化剂、信号传导蛋白、转录因子等分子功能。
2.蛋白质功能研究:
通过测序蛋白质,为功能注释和蛋白质互作用网络研究提供数据支持。
3.疾病标志物发现:
通过对病理和正常组织蛋白质组的比较,发现潜在的疾病标志物,为疾病诊断和治疗提供线索。
4.药物研发:
用于鉴定药物作用的靶标蛋白,找到新的药物靶点,有助于加速新药的研发和优化。
关于样品
我们接受以下类型的样品:
1.纯化蛋白质:请提供纯度大于85%的蛋白质样品,建议送样量为50-200ug,蛋白浓度应在0.1-1mg/mL之间。
2.蛋白质组提取物:包括但不限于来源于细胞、组织或生物体的蛋白质组提取物。建议送样量为200-500ug,蛋白浓度应在1-5mg/mL之间。
3.蛋白胶点/胶条:1D-SDS PAGE分离的蛋白胶条,2DE PAGE中的蛋白胶点,IP、Co-IP样品及GST融合蛋白Pull-down等纯化样本中的蛋白/蛋白混合物。对于胶点胶条请保证蛋白质含量至少为10ng,对于免疫沉淀样本,请提供至少20ug的蛋白质。
中/英文项目报告
在技术报告中,百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:
1. 实验步骤(中英文)
2. 相关的质谱参数(中英文)
3. 未知蛋白测序详细信息
4. 质谱图片
5. 原始数据
未知蛋白测序一站式服务
您只需下单-寄送样品
百泰派克一站式服务完成:样品处理-上机分析-数据分析-项目报告
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