蛋白质组学定量技术的原理
蛋白质组学定量技术是通过对生物体内所有蛋白质的数量变化进行定量分析,从而解析生物体的功能和性质,主要包括相对定量和绝对定量两种方式。
一、相对定量
相对定量是一种比较性的定量分析方法,通过比较同一个蛋白质在不同实验条件下的相对丰度得到蛋白质的相对定量值;常用的相对定量技术主要有2D差异电泳、标记技术(如: ICAT, iTRAQ, TMT等)和标记自由技术(如:标签自由定量,波谱计数)等。
1.2D差异电泳 (2D-DIGE)
该技术通过荧光标记的方式,将不同实验条件下的样品在同一张2D电泳胶上进行分析,最后通过比较荧光强度差异来确定蛋白质丰度的变化。
2.标记技术
通过化学标记的方式,将不同实验条件下的样品混合后进行一次性分离和分析,然后通过标记的比较来定量蛋白质的丰度,常用的标记技术有ICAT、iTRAQ和TMT等。
3.标记自由技术
无需预先进行标记,通过比较同一蛋白质在不同实验条件下的MS波谱峰面积或峰高度,或是通过波谱计数(Spectral Counting)来进行相对定量,这种方法在操作上相对简单,但分析结果的准确性较低。
二、绝对定量
绝对定量是直接测定蛋白质的实际含量,常用的技术有AQUA和iBAQ等。
1.AQUA (Absolute QUAntification)
这是一种基于同位素标记的绝对定量技术,通过添加已知含量的同位素标记肽段,作为内标对待测蛋白质进行定量。
2.iBAQ (intensity-Based Absolute Quantification)
这是一种基于波谱强度的绝对定量技术,通过计算蛋白质质谱强度与其肽段数目的比值来实现蛋白质的绝对定量。
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