tmt定量蛋白组学分析
TMT(Tandem Mass Tag)定量蛋白组学分析通过同位素标记策略,实现多样本的同步定量。过程包括将蛋白样品酶解为肽段,使用TMT标记试剂标记后混合不同样本,再通过LC-MS/MS进行质谱分析。质谱结果能根据肽段和TMT标记的质量,对蛋白质表达进行相对或绝对定量。
TMT分析的优势在于高通量定量分析,标记步骤后期加入,省去复杂分离,能同时分析最多16个样品,提高实验效率。其相对定量技术也增强了结果的可重复性。然而,TMT分析面临挑战,如对样本质量和实验操作精度的高要求,以及可能的同位素杂余干扰。
常见问题
Q1. 在TMT定量蛋白组学分析中,为什么需要对蛋白样品进行酶解?
A: 由于蛋白质的分子量范围较大,直接对蛋白质进行质谱分析难度大,因此需要通过酶解将蛋白质切割成短肽段,这样既可以降低分析的复杂度,又可以提高标记的效率。
Q2. TMT定量蛋白组学分析中的同位素杂余干扰是什么?
A: 在TMT定量蛋白组学分析中,来自低质量肽的同位素标记报告离子可能干扰高质量肽的同位素标记报告离子的检测,导致定量分析的准确性降低。这种情况被称为同位素杂余干扰。对此,需要采取一些策略进行纠正,如使用软件进行同位素纠正或采用更高的分辨率的质谱仪进行检测。
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