蛋白组学定量分析方法
蛋白质组学是研究蛋白质表达的大规模学科领域,包括蛋白质的鉴定、定量和功能分析;其中蛋白质的定量分析是蛋白质组学研究的重要组成部分,是解析生物过程的关键性技术。以下我们将介绍几种常见的蛋白质组学定量分析方法。
一、标记法定量
标记法定量主要通过标记蛋白质或肽,再用质谱进行定量分析。常用标记法定量包括同位素标记法如SILAC(稳定同位素标记法)、iTRAQ(同位素标记相对和绝对量定性蛋白鉴定)等。
SILAC是一种基于代谢标记的蛋白定量技术,通过将稳定同位素标记的氨基酸嵌入细胞的蛋白质中,可以在质谱中区分并准确定量。
iTRAQ是一种化学标记的定量方法,可以标记所有蛋白样品的肽段N端及酮酸基,每个标记剂都有不同的质量,便于在质谱中识别和定量。
二、非标记法定量
非标记法定量主要依赖质谱检测到肽段的强度信息进行定量分析,常用的非标记法定量包括标准谱图计数(spectral counting)和SWATH(Sequential Windowed Acquisition of All Theoretical Fragment Ion Mass Spectra)。
标准谱图计数基于被检测到的蛋白质谱图的数量进行定量,蛋白质谱图数量越多,说明蛋白质的丰度越高。
SWATH是一种数据独立采集(DIA)方法,可以获取所有可能的肽段断裂信息,提供更高的蛋白质覆盖率和更准确的定量。
三、标记-非标记混合定量
标记-非标记混合定量方法结合了标记法定量和非标记法定量的优点,常用的如TMT(Tandem Mass Tags)和SILAC。
TMT是一种化学标记法,每个标记剂可以标记全部肽段的氨基端和酮酸基。标记后的肽段可以进行混合,在质谱中实现多样本并行分析。
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