HCP——如果我无法获得模拟细胞系,或者我的培养条件需要存在大量血清,那么确定覆盖率的最佳方法是什么?

    这是一个具有挑战性的情况。您可以使用以下几种方法,每种方法都有缺点需要考虑。 1、使用HCP亲和柱从样品中捕获HCP,然后通过2D凝胶电泳分离以进行DIGE分析。这种方法可以让您看到检测到的蛋白质的数量,但是总蛋白质样品中的血清可能会导致2D凝胶上的HCP难以全部捕捉到,因为血清会掩盖它们或使凝胶上的HCP难以完全分解。 2、使用亲和柱或免疫沉淀与血清特异性抗体从模拟细胞样品中去除血清可能效果较好,但存在部分 HCP可能与过量血清结合并从样本中丢失的风险。 3、通过质谱分析确定存在哪些HCP。但是样品中大量的血清会影响灵敏度,导致丰度较低的HCP难以检测。 4、在ELISA的捕获步骤中使用质谱分析。这可以帮助确定您的 ELISA 检测到了哪些 HCP,但您仍然需要将其与存在的 HCP 总数进行比较。


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