为什么抗磷酸酪氨酸抗体容易出现高背景和/或信号减弱的现象?
检查是否是封阻出现问题。脱脂奶粉适用于所有蛋白印迹,但磷酪氨酸印迹除外,磷酪氨酸印迹具有与膜结合的磷酸化蛋白。用该试剂进行阻断会导致蛋白存在潜在的表位。稀释该溶液中的抗磷酸酪氨酸抗体将占据许多表位,留下较少的抗体可用于检测。因此建议在TBS+吐温20中使用1%的BSA作为阻断溶液。
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