影响质谱结果的一般因素有哪些?
质谱鉴定不成功主要分为两类。一个原因是质谱无效,另一个原因是蛋白质数据库没有参考数据。导致质谱结果不成功的原因可细分为:(1)蛋白点过浅,蛋白含量过低;(2)蛋白点太小,不利于操作;(3)虽然用二维电泳分离,但蛋白点仍是几种蛋白质的混合物;(4)蛋白质水解和质谱误差。 为了避免这些因素,需要取较深的蛋白点,且蛋白点面积需要适当大一些(对于一些小但非常清晰的蛋白点,应选择孔径较大的样品枪头。边缘上的空白是否被正确获取并不重要)。避免混合蛋白点,在酶解和质谱分析方面拥有丰富的经验。通过更换更大的数据库、取EST数据库、在单一物种蛋白质数据库的基础上建立本地质谱数据库,可以解决因没有参考数据库而导致鉴定结果不佳的问题。
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