为什么要使用2D Wb来进行宿主残留蛋白 HCP抗体覆盖率检测而不是 ELISA、LCMSMS 或 AAE？

通过2D Western blot 进行宿主残留蛋白 HCP（Host Cell Protein）检测，一般采用荧光标记进行，可以从同一凝胶和同一膜上生成 HCP 和 WB 图像。数据报告提供 HCP、Western 印迹和 HCP/Western 叠加图像，可以直接显示 ELISA 或 LCMSMS 无法提供的全面抗体覆盖率。此外，我们的大面积 2D 提供了 ELISA 或 LCMSMS 无法实现的 HCP 及其修饰形式的高分辨率图像，大大提高了覆盖的灵敏度和准确性。 AAE 基于在天然条件下与抗原的抗体免疫结合，在定量抗体覆盖率方面存在局限性： 假阳性：a) 与抗体结合蛋白直接或间接相关的蛋白；b) HCP 抗体中存在的抗原；c) HCP抗体中的共纯化血清蛋白 假阴性：a) 蛋白质复合物可能会阻断抗体结合；b) 一些结合的 HCP 或其降解片段无法洗脱 此外，AAE 还需要与下游 LCMSMS 或 2D Western blot 结合，这样冗长的过程会引入更多的变化和不一致。



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