应该使用哪种凝胶染色方法?

    凝胶可以通过许多不同的方法进行染色,包括考马斯亮蓝染色、胶体考马斯染色、铜染色、锌染色、荧光染料染色和银染色。传统的银染色与质谱分析不兼容,但一些改进的银染色程序消除了基于戊二醛的敏化剂的使用,声称与质谱分析更兼容。有几种市售的银染试剂盒都声称与 质谱兼容。然而,根据我们的经验,“质谱兼容”银染凝胶条带的胶内消化肽的产量仍远低于具有相同蛋白量的胶体考马斯染色凝胶条带的肽产量。虽然我们接受银染凝胶样品,但我们鼓励客户努力纯化足够的蛋白质样品以使用胶体考马斯、Cu 或 Zn 染色(其检测限约为 10 ng),并在纯化更多蛋白质太困难时使用银染色。从长远来看,优化纯化程序通常会得到很大的回报,因为它通常会带来在高置信水平下鉴定这些蛋白质的高成功率,这些经验对未来的工作很重要。 此外,请注意避免此步骤中的污染。徒手接触或使用脏容器或受污染的试剂可能导致鉴定失败!


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