如何在凝胶上样前浓缩蛋白质样品?

    传统的蛋白质浓缩方法,如膜透析、TCA 沉淀和膜过滤,由于样品损失百分比大,通常不适用于微量纯化过程。干燥蛋白质样品会导致高浓度的盐和任何其他化学物质可能干扰凝胶电泳。根据我们的经验,我们建议一种简单而快速的方法,该方法将蛋白质结合到一些装在微柱中的反相珠子上,洗涤以去除盐分,并在上样到凝胶之前用 SDS 上样缓冲液(煮沸或不煮沸)洗脱. 我们一直在使用 Stradegene 的 GeneClean 和 Applied System 的 R1/R2,每种方法都有良好的样品回收率。然而,由于每种蛋白质都有其独特的性质,不同的纯化程序可能会产生不同的样品,强烈鼓励研究人员确定和优化他们的最佳样品浓缩程序。原则上,浓缩样品的方式对凝胶分离蛋白的后续质谱蛋白鉴定步骤没有影响。因此,样品浓缩方法的有效性可以很容易地通过样品回收率和凝胶电泳期间此类样品的行为来判断,这可以通过运行上有相同量的预浓缩和后浓缩样品的 SDS PAGE 来监测。


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