如何克服蛋白质不同交互属性的问题？

许多蛋白质是“社会性”的，并且在称为蛋白质复合物的组中相互作用。其他一些合作伙伴相当“非社交”，只有有限的交流（例如信号转导途径），并且仅参与短暂的相互作用（即容易形成和破坏的蛋白质相互作用）。 可以使用交联剂（例如甲醛）的作用将相互作用蛋的白质“粘合”在一起。 例如，您可以在蛋白质提取物中使用0.75%的甲醛和体外交联蛋白珠。培养时间可以是10分钟，如果您“过度交联”目标蛋白质，可能会增加非特异性蛋白质背景。 可能需要考虑的要点： 1.若不保持密封，甲醛会氧化成多聚甲醛。虽然甲醛是一种零长度交联剂，但多聚甲醛不是。 2.甲醛交联，与任何其他交联剂一样，取决于底物浓度。如果您正在运行体内交联，请确保每个蛋白结合物质都以正确的水平表达，能控制正确的表达水平是关键。 3.交试剂也高度依赖于温度。因此，使用冷或温的PBS缓冲液不仅会影响目标复合物的交联，还会影响背景蛋白非特异性交联。 4.若控制表明每个交联物质都按预期表达，则要求实验过程中的甲醛浓度可能需要一些优化。 5.低浓度甲醛与质谱仪器兼容。 请使用无甲醇FA（free ammonia），因为商店提供的稳定溶液可用于消毒，但不适用于生化或细胞生物学研究。



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