如何克服蛋白质不同交互属性的问题?

    许多蛋白质是“社会性”的,并且在称为蛋白质复合物的组中相互作用。其他一些合作伙伴相当“非社交”,只有有限的交流(例如信号转导途径),并且仅参与短暂的相互作用(即容易形成和破坏的蛋白质相互作用)。 可以使用交联剂(例如甲醛)的作用将相互作用蛋的白质“粘合”在一起。 例如,您可以在蛋白质提取物中使用0.75%的甲醛和体外交联蛋白珠。培养时间可以是10分钟,如果您“过度交联”目标蛋白质,可能会增加非特异性蛋白质背景。 可能需要考虑的要点: 1.若不保持密封,甲醛会氧化成多聚甲醛。虽然甲醛是一种零长度交联剂,但多聚甲醛不是。 2.甲醛交联,与任何其他交联剂一样,取决于底物浓度。如果您正在运行体内交联,请确保每个蛋白结合物质都以正确的水平表达,能控制正确的表达水平是关键。 3.交试剂也高度依赖于温度。因此,使用冷或温的PBS缓冲液不仅会影响目标复合物的交联,还会影响背景蛋白非特异性交联。 4.若控制表明每个交联物质都按预期表达,则要求实验过程中的甲醛浓度可能需要一些优化。 5.低浓度甲醛与质谱仪器兼容。 请使用无甲醇FA(free ammonia),因为商店提供的稳定溶液可用于消毒,但不适用于生化或细胞生物学研究。


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