如何制备nanoLC-MS/MS分析的蛋白样品?

    凝胶样品—短1D PAGE:将蛋白质样品加载到1D PAGE凝胶上,仅电泳1厘米(200 V时5-8分钟)。用考马斯染色后,将整个染色区域切除为一个样品(2x5mm凝胶片)并将其送去分析。长1D PAGE:将蛋白质样品加载到 1D PAGE 凝胶上,然后照常电泳。用考马斯染色后,将整个染色区域切成5-10个较小的块(2x5mm大小)。将每件产品放入单独的管中,并寄出进行分析。2D PAGE:将蛋白质样品加载到2D PAGE凝胶上并像往常一样电泳。用考马斯染色后,切除具有多个斑点的选定区域。将每个斑点(2x5mm)放入单独的管中并运送以进行分析。注意:将所有凝胶样品切成2x5mm的碎片。溶液样品—最小样品量:5-50微克。避免使用洗涤剂、DMSO、甘油和其他非挥发性溶剂。将缓冲液浓度保持在最低限度,因为高盐会干扰MS中的电离,LC-ESI MS可能适用于含有少量盐或尿素的样品。但是,在没有洗涤剂的挥发性溶剂中,缓冲强度低,可以获得最佳结果。


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