HPLC—为什么在正相色谱中难以获得可重复的保留时间?

    正相高效液相色谱中保留时间变化的原因是保留时间与极性高的流动相组分(尤其是水)的含量密切相关。即使在流动相中没有添加水,或在极性很低的溶剂中,也会溶解少量的水。此外,裸露的二氧化硅极易吸湿,因此水会吸附在表面上。因此,正相系统中的水含量可以显著变化,很少受到控制。当使用半饱和流动相时,可获得最佳结果,例如可重复的保留时间。获得半饱和流动相的直接方法是将流动相分成等份。向一份(例如500 mL)中加入2-3 mL水并使混合物搅拌约30分钟。然后除去多余的水(分离漏斗),将干燥部分(500mL)加入饱和部分。即使半饱和流动相也会在很大程度上缩短柱达到平衡的时间。正相柱的平衡,尤其是在处理裸硅时,仍然需要数小时。此外,极性改性剂固定相,如氰基或二醇,通常不太容易发生流动相含水量变化,并且可以更快地平衡。


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