HPLC—导致保留时间可重复性较差的原因及解决办法是什么?

    1.流动相组成:大多数可重复的结果都是通过称量流动相混合物获得的。对于水/乙醇,将30/70(v/v)300克(300毫升x1克/毫升)水与546克(700毫升x0.78克/毫升)乙醇混合。特别是当使用醇类作为极性改良剂时,应避免在HPLC泵中进行混合,因为组分的粘度变化很大,不利于混合。流动相应始终新鲜制备,因为蒸发会改变双组分流动相的组成。2.温度变化:5°C的差异会使保留时间发生+/- 10%的偏移。因此,即使在环境温度下工作时,也建议使用柱式烤箱。3.酸碱度控制:酸性和碱性分析物的保留时间取决于pH值。0.1pH单位可使保留时间偏移10%。因此,建议在pKA至少2个pH单位的pH值下工作。4.不完全平衡:建议在开始分析之前,用至少10柱体积平衡反相色谱柱,至少20个柱体积平衡缓冲流动相。确保用足够的流动相吹扫所有流动相通道。正相色谱柱可能需要比反相色谱柱长10倍的平衡时间。5.除湿:高极性流动相可从疏水性多孔系统中排出,导致可接触的表面积越来越小,从而导致保留时间越来越短。


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