HPLC—流动相缓冲液应如何制备?

    流动相缓冲液基本上可以通过两种方式制备:1、在与有机改良剂混合之前调节pH。2、在pH调节之前混合缓冲液和有机改良剂。虽然pH值在水性体系中是一个很好定义的参数,但在部分有机溶剂体系中定义或测量质子浓度并不是那么简单。因此建议制备水性缓冲液,调节其pH值,然后与有机改良剂混合。应注意以下几点:(1)缓冲液在pKA的+/-1 pH单位内有效⇒选择正确的缓冲系统;(2)如果高浓度缓冲液与有机溶剂混合,考虑沉淀的风险;(3)使用前始终通过0.4 mm过滤器过滤缓冲液;(4)注意纯水缓冲液中细菌或真菌生长的风险;(5)pH通常随着有机改良剂的加入而改变,无机缓冲液(如磷酸盐)可使pH增加,有机缓冲液(如乙酸酯)可使pH降低。示例:pH7.6的磷酸盐缓冲液⇒添加40%MeOH⇒pH8.5


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