Co-IP实验与Pull-down实验有什么不同

    免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,用于确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用。Pull-down 技术又称蛋白质体外结合实验(Binding assay in vitro), 是一种行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,可用于初步研究两种蛋白质互作分析。

     

    Co-IP和Pull-down 均可用于检测蛋白相互作用,两者有很多相似之处,包括均能检测两种蛋白质之间强相互作用,但均只能进行定性分析而不能检测瞬时相互作用,同时Co-IP和Pull-down在实验原理及应用上也存在一定的区别。

     

    Co-IP实验与Pull-down 实验有什么不同呢?Co-IP可用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合,以及确定某种特定蛋白质的新的相互作用蛋白,其实验条件处于天然状态下,因此可以反映出较为真实的蛋白质之间的相互作用。由于Co-IP沉淀下来的是蛋白复合物,在纯化蛋白质复合物时,非特异性的粘附蛋白是不可避免的,所以不能直观的显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的。

     

    Pull-down在体外验证两种蛋白之间是否有相互作用,其可以去除其它蛋白的影响,可以明确目的蛋白和待检测蛋白是否直接发生相互作用。由于Pull-down实验条件是体外状态而非体内自然状态,无法得知体内真实的蛋白结合情况,因而可能会使实验结果出现假阳性,例如可能是因为电荷作用的影响造成的吸附而不是生理性的相互作用。同时,Pull-down也可以对Co-IP实验鉴定到的蛋白相互作用关系做进一步验证。若将Co-IP/Pull-down技术与以LC-MS为基础的蛋白质组学技术结合,通过一次实验便能高通量的鉴定和筛选到多个与待研究的目的蛋白存在相互作用的蛋白质(蛋白质复合物组分)。

     

    百泰派克生物科技基于专业的技术团队以及丰富的服务经验为广大科研人员提供蛋白质相互作用分析服务,包括免疫共沉淀法Co-IP蛋白相互作用分析GST融合蛋白Pull-down蛋白互作分析,后续基于高分辨率液质联用技术(LC-MS/MS)可对Co-IP样品及GST融合蛋白Pull-down等纯化样本中的蛋白/蛋白混合物进行质谱鉴定。您只需将您的需求告诉我们并寄送样品,我们会负责项目后续所有事宜,包括样品前处理、Co-IP/Pull-down、质谱分析、质谱原始数据分析。

     

    相关服务:

    蛋白质相互作用分析 

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