请问如何制作用于检测蛋白质谱的小鼠肝脏样本?
在制备用于检测蛋白质谱的小鼠肝脏样本时,我们需要以下材料和步骤:
一、材料和设备
(1)小鼠肝脏样本
(2)冰冻研磨器
(3)1.5ml的离心管
(4)PBS (Phosphate Buffered Saline)
(5)PMSF (Phenylmethanesulfonyl Fluoride) 蛋白酶抑制剂
(6)BCA (Bicinchoninic Acid) 蛋白定量试剂盒
(7)SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) 凝胶
(8)LC-MS/MS (Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry) 分析设备
二、步骤
1. 肝脏样本的收集和处理
在严格无菌条件下,取出小鼠肝脏,去除表面的疏松组织和血液,然后用PBS清洗,将清洗后的肝脏放入1.5ml的离心管中并在冰冻研磨器中研磨。
2. 蛋白的提取
添加适量的PMSF蛋白酶抑制剂到研磨好的肝脏样本中,充分混匀后在4℃下冷冻离心(10,000-15,000 g,持续10-20分钟),然后取上清液。
3. 蛋白的定量
使用BCA蛋白定量试剂盒对蛋白提取液进行定量以便知道样本中蛋白的总量。
4.蛋白质电泳
按照预定的浓度,将蛋白样品在SDS-PAGE凝胶中进行电泳,然后将电泳后的蛋白转移到膜上进行质谱分析。
5.质谱分析
将经过电泳和转膜的样品,在LC-MS/MS分析设备中分析,得出蛋白质谱。
以上就是制备用于检测蛋白质谱的小鼠肝脏样本的基本步骤,不同的实验室可能会有一些变种,但核心的步骤大体相同。
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