为啥心脏组织跑代谢组峰很少?以及组织和血清样本的前处理
- 同步处理:心脏组织应在收集后立即快速冷冻,以减少酶的活性并防止代谢物的降解。
- 均质化:使用组织匀浆机或超声破碎,确保组织均匀破碎,以提高后续提取的效率。
- 多相提取:采用如甲醇-水-氯仿的多相提取方法,可以同时提取水相和脂相中的代谢物。
- 离心清除细胞成分:收集血液后应立即进行离心,以分离血清和血细胞。
- 蛋白质沉淀:使用冷甲醇或冷乙腈进行蛋白质沉淀,以清除蛋白质并释放绑定的代谢物。
- 样本储存:血清样本在分析前应在-80°C下储存,以保持代谢物的稳定性。
心脏组织在进行代谢组分析时峰值数量较少的原因可能有多个,包括样本的本质特性、前处理的方法以及分析技术的局限性等:
1.组织特异性代谢活动:
心脏组织的主要功能是提供连续而有效的能量以支持其泵血功能,因此其代谢活动主要集中在高效的能量生成,如糖酵解、脂肪酸氧化和线粒体氧化磷酸化。这些路径相对集中,可能导致检测到的代谢物种类相对较单一。
2.样本处理过程中的代谢物损失:
心脏组织含有丰富的酶,如处理不当,可能在提取过程中代谢物被分解或转化。
3.提取效率:
使用的提取溶剂或方法可能不适合所有类型的代谢物,导致部分代谢物未能有效提取。
对于心脏组织和血清样本的前处理,关键步骤通常包括样本的稳定化、均质化、萃取和清洁。每种样本类型都有其特定的处理需求。
1.心脏组织
2.血清样本
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