脂质代谢组学研究(Lipidomics)中，怎么提取脂质以及分离外泌体

在脂质代谢组学研究中，提取脂质和分离外泌体是两个关键步骤，下面为您提供了这两个步骤的一些常用技术方法，希望对您有所帮助。

 

一、提取脂质

常用方法有Folch和Bligh-Dyer两种：

 

1.Folch方法：

• 将样本与氯仿和甲醇的混合溶剂（比例为2:1，v/v）充分混合。
• 添加适量的盐水，形成两相系统，上层是甲醇和水相，下层是氯仿和脂质相。
• 分离两相，取下层氯仿相，蒸发溶剂，即得纯脂质。

 

2. Bligh-Dyer方法：

• 使用氯仿、甲醇和水按1:2:0.8的比例处理样本。
• 同样混合均匀后离心分离两相，然后收集氯仿相。
• 该方法较Folch方法使用的溶剂较少，适合较小量的样本。

 

二、分离外泌体

外泌体的分离方法主要有以下几种：

 

1.差速离心法：

• 首先使用低速离心去除细胞和大的细胞碎片，随后使用中速离心去除死细胞和较大的囊泡，最后通过超高速离心收集外泌体。

 

2. 梯度离心：

• 通常在超速离心后，使用密度梯度离心（如蔗糖梯度）来进一步纯化外泌体，以分离出不同密度的微粒。

 

3. 尺寸排除色谱法：

• 通过色谱柱过滤不同大小的颗粒，此方法可以减少蛋白污染，保留活性。

 

4. 免疫亲和分离：

• 使用与外泌体表面特有蛋白质结合的抗体来选择性地分离外泌体。

 

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