CIEF测定过程中9.5的marker没出来峰是什么原因?
- 优化pH梯度:重新调整背景电解质组成,确保能够形成覆盖9.5 pH的梯度。
- 调整marker浓度:增加9.5 pH marker的使用浓度。
- 调整电泳条件:实验中可能需要微调电泳的电压或时间,找到最佳条件。
- 检查仪器:进行仪器维护,包括清洗和校准,确保检测器灵敏度。
- 复查样品准备:确保样品和marker的准备正确无误。
最可能的原因通常是pH梯度未完全形成或不稳定。CIEF依赖于在毛细管中形成一个精确的pH梯度,以便不同pI(等电点)的物质能在其各自的等电点处聚焦形成峰。如果pH梯度的形成有任何问题,如不完整、不均匀或不稳定,那么特定的marker就可能无法在预期的位置上形成峰。
此外,样品加载量不足(marker的浓度太低,未达到检测限)、电泳条件不适宜(电泳时间、电压或毛细管的处理不当可能影响pH梯度的形成或marker的迁移)以及仪器或检测问题(毛细管堵塞、检测器灵敏度不足或其他仪器问题也可能导致未检测到特定marker的峰)等也可能导致对应pH值的marker不产生峰。
解决办法:
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