蛋白质提取是怎么做的呀?样本是培养基,外源性添加的蛋白质
1.样本收集与准备:
首先,从培养基中收集样本。确保样本中包含了所需的外源性蛋白。
使用离心等方法去除细胞碎片和未使用的培养基。
2.蛋白质裂解:
使用裂解缓冲液(通常含有一定的洗涤剂和盐)破坏细胞膜,释放蛋白质到溶液中。
有时可能需要使用酶(如胰蛋白酶)或物理方法(如超声波)辅助裂解。
3.蛋白质提取:
对裂解后的混合物进行离心,分离出含蛋白的上清液。
可以通过盐析、透析、亲和层析等方法进一步纯化蛋白质。
4.蛋白质定量与分析:
使用Bradford法、Lowry法 或BCA蛋白定量法等来定量提取的蛋白。
SDS-PAGE凝胶电泳以及质谱等方法用于蛋白质的分析和鉴定。
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