你好,请问多糖纯化用DEAE-52过柱子的话,怎么判断上量?
DEAE-52是一种阳离子交换树脂,常用于多糖、蛋白质等生物大分子的纯化。在使用DEAE-52过柱子进行多糖纯化时,样品的上柱量可以影响分离的效果和效率。
多糖的上柱量通常由以下几个因素决定:
1.树脂的交换容量:
这是指树脂可以结合的离子数量,通常以当量/毫升树脂(eq/mL)或微摩尔/毫升树脂(µmol/mL)表示。DEAE-52的交换容量通常在1.3-1.5 meq/mL之间。
2.样品的离子强度:
这是指样品中可与树脂交换的离子数量。对于多糖,这主要取决于它的电荷密度,即每个多糖分子上带的负电荷数量。
3.样品的体积:
根据样品的浓度和体积,可以计算出样品中多糖的总量。
为了确定样品的上柱量,需要知道上述所有信息,并保证样品中的多糖量不超过树脂的交换容量。如果样品的离子强度过高,可能需要稀释样品或使用更大量的树脂。这些信息只能作为一般的指导,实际的上柱量可能需要通过实验优化来确定。例如,可以先使用一小部分样品和树脂进行试验,观察多糖的吸附和洗脱效果,然后根据结果调整样品的上柱量。
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