RNA pulldown 切下的胶送质谱如何切,如何存放?
RNA pulldown 是一种常用的生物实验方法,通过这种方法,研究人员可以鉴定与特定 RNA 分子相互作用的蛋白质。对RNA pulldown 后的凝胶进行正确切割和储存对进一步的质谱分析非常重要。需注意:
1.在切割之前应先使用紫外光源或染料对凝胶进行染色,以便于在凝胶上观察到目标蛋白质,常用的染色方法有考马斯亮蓝和银染。
2.在低背景和清洁的条件下切割凝胶。在操作过程中,请务必避免将蛋白质样品污染。
3.在凝胶中定位目标蛋白质,并使用锋利的刮刀或剪刀沿着目标蛋白质条带的上下边缘进行切割。在切割过程中,尽量减少不必要的凝胶损失。
4.将切下的凝胶条带放入适当的离心管中。推荐使用较小容量的离心管,如1.5ml或2ml的离心管。避免将不同凝胶条带混合在同一个离心管中,这样可以避免样品混淆。
5.为了防止样品在质谱分析前降解,请将离心管内的凝胶条带冷冻储存。建议将离心管放入-20℃或-80℃的冰箱中保存。请确保离心管盖严密封闭,以免样品受到空气和湿度的影响。
6.在进行质谱分析之前,将凝胶条带从冰箱中取出并解冻。接下来,对凝胶条带进行必要的处理,如洗涤、脱色、还原、煮沸等,以便质谱分析中蛋白质的鉴定和检测。
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