请问用琼脂糖胶测多糖分子量的方法步骤有吗?谢谢
琼脂糖凝胶电泳 (Agarose Gel Electrophoresis, AGE) 是一种常见的用于测量和分离多糖、DNA和RNA等大分子的方法。以下是使用琼脂糖胶进行多糖分子量测定的基本步骤:
1.准备琼脂糖凝胶:
琼脂糖胶的制备通常涉及将特定百分比的琼脂糖(通常在0.5%至2%之间,取决于目标分子的大小)加入到适当的缓冲液中(如TAE或TBE),然后加热至沸腾直到琼脂糖完全溶解。再将琼脂糖溶液倒入凝胶模具中,模具上方放置好样品槽的梳子。等待凝胶冷却和凝固。
2.加样:
在琼脂糖胶凝固后,小心的取出样品槽梳子,并将凝胶转移到电泳槽中,加入电泳缓冲液,然后将多糖样品加入到样品槽中。同时,也要加入已知分子量的标准品,这将用于之后的分子量计算。
3.进行电泳:
加好样品后,最好等样品聚集到样品孔的底部后,接上电源。根据分子大小和琼脂糖浓度,设定合适的电压,并开始电泳。通常,大分子在凝胶中迁移的速度慢于小分子。
4.染色和显影:
电泳结束后,用适当的染料(如碘化钾-碘溶液)对凝胶进行染色,然后进行显影,使多糖条带可视化。
5.分析结果:
通过对比样品和已知分子量的标准品的迁移距离,可以计算出你的多糖样品的分子量。一般来说,迁移距离和分子量呈对数关系,可以通过制作标准品的标准曲线来计算样品的分子量。
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